色谱柱使用
来源： 日期：2016-08-24
1. 色谱柱各部分名称
2. 色谱柱的安装
1) 请将液相色谱装置中的流动相完全置换后再连接色谱柱。并且请完全排出流路内的空气。
|
注意 |
装置内的液体和所使用的流动相不能相溶的情况下，请使用双方都能相溶的液体做过渡。比如从水置换到氯仿的情况，就需要使用丙酮做过渡，才能完全置换。 |
|
注意 |
将盐溶液置换成有机溶剂的时候，需要通过纯水、丙酮的顺序来进行置换。相反，从有机溶剂转换成盐溶液的情况下，需要通过丙酮、纯水的顺序置换。 |
|
注意 |
不仅仅是泵，流动相流动的所有流路都必须进行置换。例如，注入样品的情况，软管内的液体也需要置换。另外，如果使用压力计等别的软管的情况，取下来的管子也必须由流动相洗净后才能继续使用。 |
2) 色谱柱保存方法不对或者长期不使用的情况下，色谱柱的出入口可能会有空气残留。这种情况下，必须先把空气完全排出后才连接到装置中。
|
注意 |
请避免快速加热，并且注意加热温度不要超过色谱柱的最高负荷温度。 |
|
参考 |
把柱子入口侧的螺栓打开，然后加温(一般加温到手心感到温暖的程度就足够了)，等液体满出来以后接到装置上。然后，打开出口处的螺栓，用泵送液，等确认出口处有液体流出后，连接到装置中。这样操作，就算后面再连接一根色谱柱也能完全除去空气。 |
3) 请在泵运作的时候连接色谱柱。确保能让流动相按照色谱柱上箭头的方向流动的状态连接色谱柱。
4) 色谱柱加温使用的时候，先用0.2～0.3mL/min的低流量一边送液一边升温。达到所定温度后，再渐渐的增加流量至测定流量。
5) 色谱柱需要安定时间。连接到装置中立即进行测试的情况下，第一次很难得到好的分析结果。
3. 色谱柱的取下和保存
1) 色谱柱加热使用的情况下，先把流量下降到0.2～0.3mL/min，然后，继续送液的同时慢慢的把色谱柱温度降低到室温。
2) 色谱柱温度降低到室温后，先停止泵，再把色谱柱从装置中取下，拧紧两端的螺栓。
|
注意 |
色谱柱购入时的封入液和流动相不同的情况，先用封入液置换，再取下色谱柱。 |
|
注意 |
为了不漏液，请拧紧色谱柱两端的螺栓。 |
|
参考 |
室温是指保管色谱柱的场所的温度。 |
3) 色谱柱请放置于购入时的包装盒内，放在温度变化少的地方(恒温室最适合)进行保存。
4) GPC、GFC色谱柱长时间保存的情况下，推荐使用液浸保存的方法。这种情况，把色谱柱的出口端从装置上取下，连接上外径1/16英寸、内径0.8mm、长50cm的特氟龙软管。然后启动泵，特氟龙软管的前端有流动相流出后停止泵，把特氟龙管的前端浸入含有80ml浸入液的容积为100ml的瓶中。把色谱柱的入口端从装置上取下，拧紧螺帽放置在温度变化少的地方保存。
适合使用液浸法保存的色谱柱以及其适合的浸入液如下。
①浸入液使用甲苯的色谱柱
GPC KF、K、KD、AT、HT、UT、HFIP系列
②浸入液使用纯水(含有叠氮化钠作为防腐剂)的色谱柱
OHpak SB-800 HQ、PROTEIN KW系列
|
参考 |
液浸保存的时候，每个月一次，色谱柱中的溶剂用新的溶剂置换一下能更长的保持色谱柱的性能。 |
5) 3天内会再次使用的情况下，不需要把色谱柱取下进行保存。
|
注意 |
容易析出的盐溶液，腐蚀性的溶剂作为流动相的情况下，除了1天以内保存的情况外，都需要用流动相把盐溶液和腐蚀性溶剂置换后保存。 |
4. 使用保护柱的建议
1) 样品中含有易于吸收填充剂的物质或者使用被污染的样品时，色谱柱的性能可能会急剧降低。这种场合推荐使用保护柱。
|
参考 |
保护柱能长久保持分析柱的性能，但不能提高分离性能。 |
2) 保护柱应根据样品的性状、注入量，定期更换。
5. 样品的前处理
1) 一般情况下样品先用将使用的流动相溶解。
|
参考 |
使用不稳定的流动相的场合，在注入前取出流动相溶解样品。特别是使用示差折光检测器的时候，为了减小溶剂峰此操作非常重要。 |
|
注意 |
使用梯度法的时候，样品要先在最初的流动相中溶解。 |
|
注意 |
样品没有在流动相中溶解前，请不要注入色谱柱。 |
2) 为了去除流动相中的杂质和不溶物，请使用0.5μm的过滤器过滤。
3) 使用固相提取用过滤器能达到很好的前处理效果。
6. 流动相
1) 为了去除流动相中的杂质和不溶物，请使用0.5μm的过滤器过滤。
2) 流动相请充分脱气后使用。
流动相使用超声波，利用抽气泵减压脱气。流动相脱气不完全就使用示差检测器进行检测的时候，有可能会无法得到安定的基线。使用脱气机(气体除去装置)ERC-3000α系列的话能简便脱气的操作步骤。
|
注意 |
加温色谱柱使用的情况，为了避免色谱柱内部和出口产生气泡，脱气尤其重要。 |
7. 色谱柱的检定方法
出库时附带的色谱柱检定报告的理论塔板数，是通过以下的方法求得的。
理论塔板数的测定条件请参考色谱柱的检定条件。
图表的绘制速度以每分钟1.5～2.0cm为合适。调整检测器的灵敏度使图表上峰的高度在10cm左右。
8. 色谱柱的废弃方法
废弃的场合，请把色谱柱的内容物(填充剂和流动相)取出，内容物在焚烧炉中烧毁，把空的色谱柱丢弃。
|
注意 |
色谱柱受到冲击可能会造成填充剂状态改变从而导致色谱柱性能降低。请避免色谱柱从高处掉落。 |
|
注意 |
请不要弯曲色谱柱。 |
|
注意 |
打开色谱柱的终端部件可能会造成性能降低，绝对不要打开。 |
|
注意 |
开始启动时和使用中，请避免急速的压力和流量变化。为了延长色谱柱的寿命，请尽量使用配有减震器、或者没有脉动的泵。 |
